什么是多肽的純度?
多肽的純度是指HPLC方法在214nm處檢測到的目標(biāo)多肽的含量(214nm是肽鏈的吸收波長),紫外分光光度計(jì)檢測不到水和殘留的鹽不??砂l(fā)現(xiàn)其他的雜質(zhì)包括:缺失序列(缺失了一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基的靶序列),截?cái)嘈蛄校用边^程中產(chǎn)生的序列)脫保護(hù)不完全序列(產(chǎn)生于整個(gè)合成過程或*后的裂解過程)。
多肽純化不涉及水和鹽。HPLC純化會(huì)產(chǎn)生少量的TFA,如:游離的氨基末端和其他側(cè)鏈如Arg、Lys、His都可生成少量TFA雜質(zhì)。通常交付的多肽多含有微量TFA和殘留水。即使處于凍干狀態(tài),水也會(huì)因共價(jià)結(jié)合的能力不同而不同程度地存在著。
在多肽中還存在哪些其他物質(zhì)(雜質(zhì))?
雜質(zhì)
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純化前的多肽
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純化后的多肽(HPLC)
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缺失序列1
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截?cái)嘈蛄?/span>2
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脫保護(hù)不完全序列3
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裂解過程中被修改的序列4
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DTT (dithiothreitol,二巰基蘇糖醇)
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TFA (trifluoroacetic acid,三氟乙酸)
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Acetic acid(醋酸)
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某個(gè)氨基酸發(fā)生了副反應(yīng)的多肽,如脯氨酸異構(gòu)化等。
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純化前的多肽中包含的雜質(zhì)包括多肽和非多肽物質(zhì), 純化后的多肽中包含的雜質(zhì)除了TFA鹽,大多數(shù)為序列被修改的多肽。
缺失了一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基的靶序列
為避免缺失序列的產(chǎn)生而進(jìn)行的加帽操作,截?cái)嘈蛄屑串a(chǎn)生于加帽過程中
產(chǎn)生于整個(gè)合成過程或*后的裂解過程
保護(hù)基重新附著在多肽的其他位置