多肽是如何純化的?
多肽純化一般使用反相柱(如C8,C18等),214nm。緩沖體系通常為含TFA的溶劑,pH2.0。Buffer A為含0.1%TFA in ddH2O,Buffer B為1%TFA/ACN/pH2.0。純化前用Buffer A溶解;如果溶解不好,用Buffer B溶解后,然后用Buffer A稀釋;對疏水性強(qiáng)的多肽,有時還需要加入少量的Formic Acid或醋酸。HPLC分析多肽粗產(chǎn)物,如果多肽不長(15aa以下),一般會有主峰,主峰通常為全長產(chǎn)物;對于20aa以上的長肽,如果沒有主峰,HPLC需搭配Mass來判定分子量,進(jìn)而確定哪個峰是所要合成的多肽。