如何選擇適合自己研究的多肽純度?
多肽的純度與多肽的凈含量
多肽的純度是指HPLC方法在214nm處檢測到的目標多肽的含量(214nm是肽鏈的吸收波長),紫外分光光度計檢測不到水和殘留的鹽份
多肽含量則是指樣品中肽類物質相對于非肽類物質所占的百分比。通常一條多肽產品中除了多肽本身還包括生產過程中帶入的非鹽組份,如水,被吸收的溶劑、配位離子和鹽等。
引起多肽的不穩(wěn)定的原因
脫酰胺反應:在脫酰反應中,Asn/Gln 殘基水解形成Asp/Glu。
氧化多肽溶液易氧化的主要原因有兩種,一是溶液中有過氧化物的污染,二是多肽的自發(fā)氧化。在所有的氨基酸殘基中,Met、Cys和His、Trp、Tyr等*易氧化。
水解:多肽中的肽鍵易水解斷裂。由Asp參與形成的肽鍵比其它肽鍵更易斷裂,尤其是Asp-Pro和Asp-Gly 肽鍵。
形成錯誤的二硫鍵:二硫鍵之間或二硫鍵與巰基之間發(fā)生交換可形成錯誤的二硫鍵,導致三級結構改變和活性喪失。
旋:除Gly外,所有氨基酸殘基的α碳原子都是手性的,易在堿催化下發(fā)生消旋反應。其中Asp殘基*易發(fā)生消旋反應。
β-消除:β-消除是指氨基酸殘基中β碳原子上基團的消除。Cys、Ser、Thr、Phe、Tyr 等殘基都可通過β-消除降解。在堿性PH下易發(fā)生β-消除,溫度和金屬離子對其也有影響。
變性、吸附、聚集或沉淀變性一般都與三級結構以及二級結構的破壞有關。在變性狀態(tài),多肽往往更易發(fā)生化學反應,活性難以恢復。在多肽變性過程中,首先形成中間體。通常中間體的溶解度低,易于聚集,形成聚集體,進而形成肉眼可見的沉淀。
公司對合成的多肽提供分裝服務嗎?
合生生物生物提供部分或全部訂單,免費分裝成小份。由于少量分裝可以避免多次反復凍融,減少容器的開蓋和閉合的次數,減少處理不當或細菌污染的機會,讓您的多肽更加穩(wěn)定。
多肽應該如何保存?
多肽一般是以凍干粉的形式保存,其在-20℃很穩(wěn)定,特別是冷凍干燥后并保存于-20℃干燥器中,大多數肽在此溫度下可以存放幾年不變。如果一次使用的肽量不多,*好分裝成幾個小包裝,取用更為方便。
為減少濕度的影響,在將凍干肽暴露于空氣之前,應先將其在干燥的條件下恢復至室溫。當無法冷凍干燥時,*好的方法是以較小的樣量存放,并盡快使用。
對于含Met,Cys或Trp的多肽,脫氧緩沖劑對其保護必不可少,因為這種多肽易被空氣氧化,比較好的解決方法是可以在封瓶前,慢慢通入氮氣或氬氣流從而降低氧化作用,沒有條件的建議-80度干燥凍存。
含Gln或Asn的多肽也容易降解,所以相對于其他不含此類氨基酸的多肽,其保存期較短。
如何對合成的多肽進行質檢?
合生生物生物免費提供HPLC和MS檢測結果。公司所有多肽均采用反相色譜法純化。以質譜法測定肽的分子量來確定產品是否正確,MS檢測結果還可顯示大部份的主要雜質。如果必要,還可提供肽凈含量檢測,如氨基酸分析或元素分析。這些方法可以證實多肽的氨基酸組成,他們均可作為多肽確認的補充方法。所有交付的肽均達到了您要求的純度。沒有達到純度要求的那些多肽均被丟棄。當然如果您有需要,也可以發(fā)送給您。
熒光標記時,肽和修飾標記的染料之間需要加一個間隔嗎?
多數染料屬于大分子量芳香族氨基酸,在多肽中引入這一類大型分子,為了避免多肽與標簽之間發(fā)生相互作用,維持蛋白的構象及其生物學活性,我們推薦引入一個可彎曲的間隔區(qū),比如Ahx, Ahx是一個含有6碳分子的環(huán)狀結構,可以維持熒光標簽的穩(wěn)定性。否則,F(xiàn)ITC很容易結合多肽序列中的半胱氨酸殘基或者賴氨酸殘基。
通常情況下,生物素、FITC一類的染料既可以標記在蛋白的氨基端也可以標記在蛋白的羧基端。然而,為了在*短時間內,*便捷又高效地合成多肽,***推薦客戶選擇標記在氨基端。因為一個多肽的合成往往是從羧基端開始的,這樣一來,氨基端的修飾便成為*后一個環(huán)節(jié),不需要再進行特別的結合作用。反之,羧基端修飾需要額外的環(huán)節(jié),因此過程更加復雜。
為什么要進行N端乙酰化,C端酰胺化修飾?
化學合成的肽往往攜帶游離的氨基和游離的羧基。而肽的序列往往代表了母本蛋白的序列,為了與母本蛋白更為接近,肽末端往往需要封閉,即N端乙?;虲端酰胺化,這些修飾會減少多肽的總電荷,降低多肽的溶解度,也可以使肽模擬它在母本蛋白中α氨基和羧基的原始狀態(tài)。
如果需要對N端進行乙?;揎椈驅端進行酰胺化修飾,請在下單時明確。合成一旦結束,則不能再進行修改。
能夠合成的多肽的*大長度是多少?
我們成功合成了長度為120個氨基酸的多肽。 50個氨基酸長度的多肽屬于常規(guī)合成。
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